培养基制备的操作步骤

发布时间：2014-03-10 阅读：618次

（一）营养琼脂培养基 

1计算

根据营养琼脂培养基的说明书了解营养琼脂粉与水的比例，一般是1000 mL蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g，再根据培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。

         营养琼脂粉的量=31.3×15×n/1000 （g）

 其中：

        15代表一个平板需要营养琼脂约15 ml；

         n代表要做的培养基平板的数量

2.称量

用普通天平称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相应的蒸馏水的量，要尽量。

3.溶化

将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶化，边加热边搅拌，沸腾时立即从电炉上拿下，等泡沫消失后再放在电炉上加热，注意不能让琼脂溢出，煮沸2—3次。 或选用培养基制备仪可使整个过程自动化进行。

4.倒平板或倒试管分装

若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右，以刚好覆盖平皿底为易。若做斜面培养基应倒入试管中，量为试管的1/3。可选用培养皿分装仪，进行自动分装。

5．灭菌：用高压灭菌器灭菌

将平板培养基整齐地平放入高压灭菌器的内筒中，将试管口盖上棉塞或橡胶塞，用纸包扎好，直立放入内筒中，在121.3℃灭菌20-30min。如果选用自动分装仪则自动灭菌装置，可省略此步骤。

灭菌完毕后，将平板培养基拿出平放于桌面，凝固前勿动；将试管培养基摆成斜面，凝固前勿动。

6．无菌检验

随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小时，若无菌 生长则为合格。

7．备用

将合格的平板培养基和试管培养基放入冰箱，在0-4℃中保存备用

（二）血液琼脂培养基。

将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃，以无菌操作，加入5%～10%的无菌血液（或脱纤维血），然后倾注平皿或分装试管制成斜面。 

（三）肉汤培养基

1．成分  牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。

2．制法  将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸气灭菌器内，121.3℃灭菌20min即成。

3．用途  可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种。

（四）半固体培养基

肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或观察细菌的运动性