旋转混合器的典型应用实例（从动物组织中提取基因组DNA）

发布时间：2014-02-28 阅读：998次

1. 组织块解冻，取适量组织于PBS溶液中清洗干净后放入装有500微升PBS的离心管中（1.5ml），用剪刀剪碎；12000rpm离心8min，取出弃上清；

2. 加入0.45ml TES混匀，再加入50ul SDS（10%），20ul蛋白酶K（20mg/ml），混匀后，于56℃保温4-6h，每2h摇1次,至体系透亮为好。

3. 放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），上下温柔翻转5min,12000r/m，离心10min，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。

4. 加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），上下温柔翻转5min，12000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5ml离心管中。

5. 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），上下温柔翻转5min，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5ml离心管。

6. 加入1/10体积的NaAc（4℃保存），加入2倍体积的-20℃预冷的无水乙醇沉淀DNA，置于-20℃中保存30min或久；观察现象。

7. 12000 r/m，离心10分钟，弃乙醇。

8. -20℃保存的75%乙醇洗涤，12000 r/m，离心5分钟，去乙醇，55℃干燥DNA。

9. 加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定）（一般50μL），-20℃保存备用。